先來看看或參考一下
對常見的生化項(xiàng)目可以按以下順序安排檢測
P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP(a)、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。
我們平時(shí)有關(guān)注過這個(gè)問題吧,可能大多數(shù)同行們都沒有太注意吧,為什么要這樣做,如何排查是否存在這個(gè)問題以及有問題時(shí)怎么解決呢?一起來看一下吧。。。。。。
試劑中含有下一個(gè)檢測所要測定的底物,或是含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)的底物有作用,因而直接干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果;另一種原因是該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來間接的干擾,因?yàn)樵谟性噭┪廴镜那闆r下,下一個(gè)測試所測定的是前后兩個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。部分已知的常用試劑間可能產(chǎn)生的相互干擾如下:
1、pH值改變:試劑中反應(yīng)緩沖液之間因儀器攜帶污染而使下一反應(yīng)的pH值改變,使下一反應(yīng)達(dá)不到最佳狀態(tài)。如雙縮脲法測血清總蛋白,若其他條件相同,反應(yīng)在堿性(pH值8-9)條件時(shí),蛋白肽鍵(—CONH)才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應(yīng),完全測出血清蛋白的總量。若pH<8時(shí),總蛋白測定結(jié)果偏低,直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結(jié)果。酶活力測定在最適pH值時(shí),反應(yīng)最快,靈敏度最高,但是因?yàn)榫彌_能力有限,可因攜帶污染使酶促反應(yīng)出現(xiàn)無效值。大多數(shù)酶反應(yīng)pH值在6.0-7.5之間;ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下最適宜。
2、TG、T-CH、UA、MG試劑中含有膽酸鹽,對循環(huán)酶法測定膽汁酸能產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。
3、ALT(IFCC)、AST(IFCC)試劑中含有高活力LD成分,有可能會(huì)對LD的測定帶來干擾。
4、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)試劑中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過程,因此可能對Glu測定帶來干擾,尤其對Glu的HK法測定可能帶來嚴(yán)重干擾。
5、Glu(HK)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、TG、HDL-C、LDL-C(直接法)等試劑中使用了鎂鹽,可能會(huì)對其后的Mg2+ 測定帶來干擾[2];TP試劑中高濃度的Cu2+對Mg2+測定也會(huì)產(chǎn)生干擾。
6、ALT、AST、LDH、CK、CK-MB、UA、r-GT、TP,LDH等試劑由于試劑中含有K+或者與K+的酶法測定有相同或相反的進(jìn)程,對K+的酶法測定產(chǎn)生干擾。
7、ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液,可能會(huì)對無機(jī)磷的測定帶來干擾。
8、Mg2+試劑(Calmagite)中含有EGTA成分,為Ca2+絡(luò)合劑,可能對Ca2+的測定帶來干擾。
9、CK檢測不應(yīng)在ALP、Ca檢測之前,因CK反應(yīng)液中加入EDTA-Na,能抑制ALP活性,結(jié)合Ca而使結(jié)果偏低。
10、BUN酶法測定因谷氨酸脫氫酶(GLDH)消耗NADH,不能放在底物NADH如ALT、AST項(xiàng)目前檢測。
事實(shí)上各個(gè)廠家所提供的產(chǎn)品說明書常不能夠全面反映試劑組成的情況,而生化反應(yīng)的影響因素又是相當(dāng)復(fù)雜的。因此,通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)試劑交叉污染可能帶來的干擾顯得更加重要。具體可以通過以下幾個(gè)試驗(yàn)來排查和發(fā)現(xiàn)試劑間可能發(fā)生的干擾。
1、將某一試劑作為樣本進(jìn)行全套項(xiàng)目測定,考察結(jié)果的情況,進(jìn)而確定發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成直接干擾的項(xiàng)目;雙試劑的R1、R2兩種都要做,這樣在解決干擾時(shí)有針對性。
2、1份樣本分為兩份,一份加生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)南♂屢海硪环菁拥攘康脑噭瑫r(shí)測定、考察結(jié)果的變化,進(jìn)而確定可能發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成干擾的項(xiàng)目。
3、懷疑A項(xiàng)試劑對B項(xiàng)目存在干擾,可以用樣本先單做B項(xiàng)目若干次;然后先做A項(xiàng)目,接著做B項(xiàng)目若干次。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,可以知道A試劑通過試劑針對B項(xiàng)目的干擾程度。
通過以上常見試劑間相互干擾的原因的分析及試劑干擾的排查的試驗(yàn),應(yīng)可以有針對性采取一些措施消除試劑間的干擾,常用的方法有下面幾種:
1、為減少試劑間的相互干擾,應(yīng)定期對儀器進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋pB(yǎng),如更換管道,用去污劑、酸性洗液清洗比色杯,用去污劑擦清試劑針,用苯甲醇擦洗攪拌棒等。
2、合理安排檢測項(xiàng)目的順序:一般在安排項(xiàng)目順序時(shí)要求兩個(gè)項(xiàng)目間至少要有一個(gè)非干擾項(xiàng)目,而最徹底的做法則是將被干擾項(xiàng)目置于干擾項(xiàng)目之前,以消除干擾發(fā)生的可能。同時(shí)要求檢驗(yàn)人員對儀器的工作狀態(tài)要了如指掌,并在一個(gè)樣本的項(xiàng)目選擇或一個(gè)樣本的最后一項(xiàng)與下一樣本的第一個(gè)項(xiàng)目選擇時(shí)對于試劑交叉污染的可能性加以考慮,合理安排項(xiàng)目順序,以便得到更為合理的結(jié)果。
對常見的生化項(xiàng)目可以按以下順序安排檢測:
P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP(a)、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。
3、一些生化分析儀還有額外的沖洗功能,可以在被干擾項(xiàng)目檢測前對試劑針,比色杯用酸性洗液、堿性洗液進(jìn)行2次或多次沖洗,以減少項(xiàng)目間的交叉污染。
4、有的全自動(dòng)化分析儀器有不同的通道,可以將有干擾的項(xiàng)目排在不同的通道中檢測。
5、選用具有抗交叉污染的試劑盒:如在游離膽固醇試劑中添加膽固醇酯抑制劑,以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯引起對游離膽固醇測定的污染。
通過以上幾種方法,大部分試劑間的交叉污染能夠被解決,實(shí)際工作中,用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行連續(xù)的多個(gè)項(xiàng)目的測定,每個(gè)反應(yīng)的詳細(xì)過程難以探知,因此要求我們在實(shí)際工作中必須對生化分析儀的工作原理,方法,流程,狀態(tài)非常了解,還須對試劑的組成,反應(yīng)原理作深入的分析,理論分析結(jié)合實(shí)際應(yīng)用,方可以摸索出一套符合本單位工作的方法。